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ELISA檢測(cè)試劑盒使用血清提取蛋白的制作辦法

更新時(shí)間：2019-06-25      瀏覽次數(shù)：2608
 　　ELISA檢測(cè)試劑盒使用血清提取蛋白是從血清中提取的蛋白質(zhì)，適用于食物工業(yè)的食物增加劑和醫(yī)藥制劑。
　　通常提取蛋白質(zhì)的辦法是離心分離，除掉血漿，使二價(jià)鐵血紅素酸化，并將其掃除。但是這種辦法產(chǎn)量很低(100毫升血液僅可提取蛋白質(zhì)約10)克。
　　為了進(jìn)步蛋白質(zhì)得率，選用新的辦法，即用每分鐘2500～3000轉(zhuǎn)的速度在15～30分鐘內(nèi)將血液進(jìn)行離心分離，使醋酸和氯化鈉的混合物(比值為2∶1～4∶1)酸化。在溫度90～110℃下加熱5～15分鐘。冷卻，再增加yi醚。
　　制作辦法：
　　取經(jīng)過安穩(wěn)的血液，作離心分離15～30分鐘，每分鐘轉(zhuǎn)速為2500～3000轉(zhuǎn)。從而獲得固形物，去除血漿，用水使固形物沉渣溶解。置血紅素于培養(yǎng)基中。為了使培養(yǎng)基酸化而使血紅素分子中的二價(jià)鐵血紅素和血球蛋白的結(jié)合體分離預(yù)先制備好醋酸和氯化鈉的混合物并將它加熱到90～110℃?；旌蠒r(shí)將固形物的溶血產(chǎn)品緩慢地增加到加熱的混合物中。從頭把溫度逐漸地升高到沸點(diǎn)，煮沸5～15分鐘，以便使結(jié)合體*分離，接著將混合物逐步冷卻到室溫。
　　為了使二價(jià)鐵血紅素溶解并消除，進(jìn)口ELISA檢測(cè)試劑盒在混合物中按溶物產(chǎn)品比值2∶1～5∶1增加yi醚。這時(shí)提取出來的蛋白質(zhì)呈白棉絮狀。將溶液過濾，再用yi醚清洗。
　　100毫升血中提取的蛋白質(zhì)產(chǎn)品相當(dāng)于14.4克。使用這種辦法，每100毫升的血液可進(jìn)步蛋白質(zhì)得率45。
　　根據(jù)血紅蛋白含量的不同，胎牛血清可表現(xiàn)出黃色或赤色，我國(guó)的細(xì)胞培養(yǎng)用血清標(biāo)準(zhǔn)是不高于20mg/dl，實(shí)際上，血紅蛋白含量的凹凸對(duì)血清并無直接影響，這個(gè)指標(biāo)的意義在于能體現(xiàn)出采血過程的謹(jǐn)慎規(guī)范程度，杰出的操作能下降血清的溶血。
　　國(guó)產(chǎn)血清的基本上是采血后立刻離心收集，所以很少會(huì)有溶血，表現(xiàn)出亮堂的蠟黃色。進(jìn)口胎牛血清或多或少總有點(diǎn)溶血，因?yàn)樘ヅＱ迥τ貌?，紅細(xì)胞簡(jiǎn)單破裂。
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